概述:
一步法总RNA提取试剂Redzol是由酚与异硫氰 酸胍组成的均相溶液。不仅可直接用于从人类、动 物、植物、细菌等细胞或组织中提取总RNA，而且还可以从样品中提取DNA或蛋白质。纯化的总RNA完整性好，不受蛋白、DNA的污染。可用于Northern 杂交、RNA点杂交、poly(A)+mRNA的分离、体外转 录、RT-PCR、RNase封阻分析以及分子克隆。

性能指标:
RNA产量一般为1-15μg RNA/mg组织或1×106 个细胞，A260/A280的比率一般在1.6~1.8之间。

使用优点:
操作简单：1小时即可完成整个RNA的提取，不仅 适用于小量组织（50~100mg）和细胞中（5×106） RNA的提取，还适用大量组织（>1g）和大量细胞 （>107）中RNA的提取。 纯度高：提取的总RNA不受蛋白、DNA等的污染。物美价廉：与其它进口同类产品相比质量相当，操作相同，但价格便宜将近一半。

物理特性:
红色透明液体，2~8℃保存，保存期限为12个月。 注意事项具有强的腐蚀性，若不慎接触皮肤，应立即用大量的洗涤剂和水进行冲洗；若感觉不舒适，应立即就诊。

注意事项:
具有强的腐蚀性，若不慎接触皮肤，应立即用大量的洗涤剂和水进行冲洗；若感觉不舒适，应立即就诊。

用户自备试剂:
1. 氯仿 2. 异丙醇 3. 75%乙醇（用DEPC处理的水） 4. DEPC水或0.5%SDS溶液

操作方法:
1.准备
估算Redzol或组织细胞的用量。每1ml Redzol的组织用量为50~100mg；细胞用量为5~106个 细胞。
2.组织或细胞的裂解
a、贴壁细胞
吸尽培养液，加入Redzol，用枪反复吹打数次，确保全部裂解，然后转移至新的离心管中。裂解 10cm2细胞需要1ml Redzol。 注：Redzol的加入量不是根据细胞数目来决定，而是根据细胞培养皿的面积（10cm2/ml）来决定。
b、悬浮细胞
离心收集细胞，吸尽液体，加入Redzol用枪吹打数次，确保全部裂解（某些酵母和细菌要用匀浆器匀浆才能全部裂解），然后转移至新的离心管中。按1ml Redzol可裂解5~10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞的比例加入Redzol裂解细胞。 注：应避免在Redzol加入前洗涤细胞，这样会增加mRNA降解的几率。
c、组织
先将新鲜组织剪成小块，放入匀浆器内，加入Redzol用匀浆器匀浆，然后转移至新的离心管中。 或者将组织在液氮中研磨成粉末后，加入Redzol中。每50~100mg的组织加入1ml Redzol进行裂解。 注：样品总体积不要超过所用Redzol体积的10%。
3.分相
a 将匀浆液15~30℃静置5分钟使其充分裂解。
b 每1ml Redzol中加入0.2ml的氯仿，震荡混匀后15~30℃静置2~3分钟。
c 2~8℃ 12,000g离心15分钟。离心后混合物分成三相（下面的酚/氯仿相、中间的白色界面、上 面的无色水相）。RNA全部在无色的水相中。 注：对于含有高浓度蛋白、脂肪、多糖或纤维素（肌肉、脂肪组织、植物的微管组织）的样品，在 分相前可以附加一个分离步骤：匀浆后2～8℃ 12,000g离心10分钟弃沉淀。RNA溶解在上清液 中，纤维素、多糖、大分子量的DNA以不溶的形式沉淀从而与RNA分离。对于脂肪组织的样品， 上面一层脂肪组织可以被清除掉，将清澈的匀浆 液转移到另一新管中，继续进行第3步分相。
4.沉淀RNA
转移上层水相到另一新离心管中，按0.5ml异 丙醇/1ml Redzol 比例加入异丙醇，充分混匀后 15~30℃静置10分钟，然后2~8℃ 12,000g离心10 分钟，RNA形成白色的小团沉淀在离心管的底部和 侧面。 注：一定不要吸取中间界面；若同时提取DNA和 蛋白质，于4℃保留下层酚相。
5.洗涤RNA
弃上清，RNA沉淀于管底。按1ml 75%乙醇/ 1ml Redzol加入75%乙醇，漂洗2~3次RNA沉淀， 2~8℃ 7,500g离心5分钟，尽量弃上清。
6.溶解RNA
在无菌工作台中干燥RNA沉淀5~10分钟。可用DEPC处理的50μl H2O、TE buffer 或0.5% SDS 溶解RNA样品，55-60℃温育10分钟使RNA完全溶解。注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

常见问题解答：
每mg组织或106培养细胞的RNA产率 ：

RNA产率低：
样品裂解或匀浆不完全；提取的RNA溶解不 完全。

A260/A280k<1.65：
紫外检测时RNA样品应用水稀释，不能用TE 稀释，低盐离子溶液和低pH值溶液致使其在280nm 的吸收值增加（Wilfinger, W. et. AL, Biotechniques 22: 474-481; Fox, D.K.(1998) Focus 20: 2 p.37）。样品 匀浆时加入试剂体积太少，匀浆后溶液分层不明 显，水相被酚污染。最后提取的RNA样品不能完全 溶解。

RNA降解：
使用的动物组织没有被立即冻上或放入Redzol 中匀浆；分离使用的样品或制备的RNA长期贮存在 了-5~-20℃，而不是贮存在-60℃~-70℃。提取RNA的细胞被胰蛋白酶分解，易导致提取的RNA降解。水相或使用的离心管没有完全处理仍残留有RNase。 变性凝胶电泳使用的甲醛pH值低于3.5。

RNA污染：
样品匀浆时加入试剂体积太少；分离使用的样品含有有机溶剂（乙醇，DMSO等），盐离子或碱溶 液。

蛋白多糖和多糖污染：
改进RNA沉淀方法：起始匀浆中每加1ml的 Redzol，水相中加入0.25ml的异丙醇和0.25ml的高盐溶液（0.8M的柠檬酸钠，1.2M的NaCl），混匀，离心，接着进行下一步RNA的提取。此方法有效的 沉淀了RNA，而蛋白多糖和多糖仍保留在水相中。 为了从多糖含量高的植物材料中获得高纯度的 RNA，推荐采用改进的RNA沉淀和起始匀浆液离心这些步骤。