概述：
M-MLV反转录酶是一种依赖于RNA的DNA 聚合酶，反应需要DNA引物和RNA模板合成完整 的cDNA链。该酶是Moloney鼠白血病病毒的pol基 因的产物，由分子量为71KD的单个亚单位组成。该 酶只具有很弱的RNase H 活性，可用于较长的 cDNA链的合成。浓度为200units/μl，-20℃保存。

浓度：200U/μl

来源：Moloney鼠白血病病毒

应用：以RNA为模板合成cDNA链、RT-PCR

随酶附带缓冲液： 5×反应缓冲液（0.5ml）：250mM Tris-HCl， 375mM KCl，15mM MgCl2，0.2% Tween 20，pH8.3 100mM DTT（0.3 ml）

贮存缓冲液：20mM Tris-HCl，150mM NaCl， 0.1mM EDTA，1mM DTT，0.1% IGEPAL CA-630， 50% Glycerol，pH 7.6，-20℃保存。

活性定义：以Poly(A)/oligo(dT)为模板/引物， 在37℃、10分钟的条件下，使1nmol的dTTP掺入 酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活力单位 （U）。

质量检定：用200U的M-MLV反转录酶在 37℃~42℃孵育1μg的DNA和RNA 3小时，未检 测到DNA酶和RNA酶活性。

操作步骤：

cDNA第一链合成（20μl反应体系）

1. 在微量Tube管（例如0.2ml或0.5ml PCR管）中 加入下列成份：
模板总RNA/Poly(A)+ RNA 　　　　　　　　　1μg/5ng-100ng
Oligo(dT)18或随机引物(dN)9 　　　　　　　　10-100pmol
DEPC处理水　　　　　　　　　　　　　　　 适量

2. 70℃ 5分钟变性RNA和引物后，立即冰浴2分钟。

3. 加入下列反应液：
5×M-MLV buffer　　　　　　　　　　 4μl
100mM DTT 　　　　　　　　　　　　2μl
dNTP（各10mM）　　　　　　　　　 1μl
RNasin　　　　　　　　　　　　　 　20U
M-MLV RTase 　　　　　　　　　　　200U
步骤1+步骤3总反应体积20μl

4. 轻轻弹匀。

5. 用Oligo(dT)18时42℃保温1小时；用随机引物(dN)9 时37℃保温1小时。

6. 94℃ 5分钟，使M-MLV反转录酶变性失活，4℃ 或冰上冷却。得到的反应液用于下一步PCR反 应。