产品简介：
蛋白提取试剂可以非常方便地从各种组织，细胞中提取蛋白，该试剂盒含有5种酶抑制剂（PMSF、EDTA、PepstatinA、Leupeptin、Aprotinin），阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

使用前须知:
蛋白提取液中通常含有去污剂，它是一个两性分子，由一个亲水性头部和疏水性尾部组成，两部分联合形成一个微团。溶解的蛋白与微团形成脂-去污剂的混合物，跨膜蛋白形成蛋白脂去污剂复合体。形成微团的程度称为CMC（主微团浓度），它对高效地提取高纯度蛋白非常重要。CMC受pH、温度、离子强度、有机溶剂中的多价离子、去污剂纯度等的影响。
根据去污剂的离子特性，可将其分为：离子去污剂、非离子去污剂和兼性离子去污剂。其中，离子去污剂又可分为阳离子去污剂（SDS、LiDS和DOS）和阴离子去污剂，这些高变性的离子去污剂常将蛋白变性为单聚物，常用于Western blot分析及紫外检测蛋白浓度。而非离子去污剂（如TritonX-100）也会使蛋白变性，但变性程度比较低，常用于蛋白相互作用的研究。
兼性离子去污剂（如CHAPS）同时含有正、负可变的头部，更适用于蛋白相互作用的研究，它对蛋白的变性作用不及离子去污剂强烈。在提取蛋白时，选择合适的缓冲液和去污剂十分重要。

产品特点：
从细胞，组织中提取蛋白不经过前处理。
将蛋白提取的时间缩短至20～30分钟。
含蛋白稳定剂提取的蛋白稳定。
提取过程中避免了-20℃冻融，避免了由于冻融造成的蛋白降解。
提取的蛋白-20℃稳定保存6个月以上。
紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
由于离子去污剂使蛋白变性为单聚物，有利于Western Blot分析。
Western由于离子去污剂使蛋白变性为单聚物，有利于蛋白分子量分析。
蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，没必要在提取的过程中再加蛋白酶抑制剂。

操作流程
从细胞中提取蛋白：
1. 准备细胞。注意：在50ml的试管中加入贴壁培养的细胞或悬浮培养的细胞，2,000~3,000rpm离心5min，然后用PBS（最好用DPBS）冲洗，用细胞计数器计数（约5×106培养细胞）。
2. 13,000rpm离心10~20秒收集细胞沉淀。注意：离心后用移液器吸弃上清。20～30分钟。
3. 用400μl 蛋白提取液悬浮细胞，充分混匀。注意：可根据不同的细胞类型加入不同体积的蛋白提取液。一般每5×106培养细胞加400μl 蛋白提取液，但细胞大小不同需要的提取液用量也不同。用移液器吸取蛋白提取液要小心避免产生气泡。
 4. 在-20℃或冰上孵育10~20min使细胞裂解。注意：蛋白提取液在-20℃不会结冰。其中的蛋白酶抑制剂可稳定蛋白防止其降解。孵育前最好用注射器抽吸细胞以促进细胞裂解，此时会产生气泡，孵育和离心后气泡会消失，对实验无影响。
5.13,000rpm离心5min，将上清转移到一新的1.5ml的离心管中。
6.检测蛋白浓度。注意：按考马斯亮蓝等方法检测蛋白浓度，蛋白提取液溶液中不含背景吸收物质，不会造成干扰。

从细胞中提取蛋白：
1. 准备约10~20mg组织。注意：将取出的组织置于合适的管中，组织要尽量新鲜。
2. 加入600μl 蛋白提取液使组织匀浆化。注意：可根据不同的组织类型加入不同体积的蛋白提取液，一般每10mg组织加入600μl 蛋白提取液，可根据每次试验加入合适体积的提取液。用匀浆器打碎组织时会有气泡产生，孵育或离心后气泡会消失，对试验无影响。20～30分钟。
3. 在-20℃或冰上孵育20~30min使细胞裂解。注意：蛋白提取液在-20℃不会结冰。其中的蛋白酶抑制剂可稳定蛋白防止其降解。孵育前最好用注射器抽吸细胞以促进细胞裂解，此时会产生气泡，孵育和离心后气泡会消失，对试验无影响。
4. 以下步骤与从细胞中提取蛋白的步骤相同。

技术信息
导言：
用蛋白提取液可以从各种组织、细胞中提取总蛋白。该试剂含有5种蛋白酶抑制剂防止蛋白的降解。蛋白提取液中含有去污剂，可以溶解包括细胞质膜和核膜在内的细胞膜，该试剂盒可以非常方便地提取细胞核和细胞质成分中的所有蛋白。

试验信息：
从不同组织，细胞中提取蛋白
蛋白提取试剂盒为试验工作者提供了简单、快速的从各种细胞、组织中提取总蛋白的方法。

1>细胞

2>组织

Western Blot 分析
从癌细胞系提取的蛋白用来分析CDK2蛋白的表达。
<SDS-PAGE> <Western Blot>

图1.SDS-PAGE和Western分析
采用蛋白提取试剂盒从SNU601和K562细胞中提取的总蛋白。总蛋白4%-12%PAGE电泳，考马斯亮兰染色。Western-blot分析癌细胞系CDK2蛋白的表达。